貼壁細胞原位轉(zhuǎn)染

貼壁細胞的轉(zhuǎn)染是生命科學家們一直以來都比較頭疼的問題，尤其是基于電穿孔的原理將外源DNA向貼壁細胞的導入。2011年，上海勁馬生物研發(fā)出了基于24孔板的原位貼壁轉(zhuǎn)染。即可對培養(yǎng)在24孔板中的細胞在生長周期中的任意階段進行貼壁轉(zhuǎn)染，無需任何物理或化學消化。這就克服了傳統(tǒng)的電穿孔將貼壁細胞懸浮影響其本身的生理狀態(tài)的障礙。這種轉(zhuǎn)染模式不僅適用于新鮮分離培養(yǎng)中的貼壁細胞，而且對于凍存的貼壁細胞如原代神經(jīng)元的轉(zhuǎn)染也大有裨益。因為可以在復蘇后培養(yǎng)的任意生命階段進行轉(zhuǎn)染。zui先商品化的為AD1 4D-Nucleofector™ Y kit,適用于原代神經(jīng)細胞的貼壁轉(zhuǎn)染。如原代神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞、以及神經(jīng)干細胞等。根據(jù)不同的神經(jīng)細胞類型，培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)時間的不同，轉(zhuǎn)染效率在20%-70%之間。

應用:  24孔板內(nèi)原代神經(jīng)元的貼壁轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染前，神經(jīng)細胞培養(yǎng)在標準的24孔培養(yǎng)板內(nèi)。轉(zhuǎn)染時，棄細胞培養(yǎng)液，加入轉(zhuǎn)染液并將24孔電極板插入24孔培養(yǎng)板。將此三明治結(jié)構(gòu)的板放入4D Y unit進行轉(zhuǎn)染。24個孔可設(shè)置24個獨立的轉(zhuǎn)染程序

4D Nucleofector—的靈活性

1. 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)量的靈活性：轉(zhuǎn)染細胞數(shù)量在2×10^4-2×10^7個cells/反應

2. 轉(zhuǎn)染通量的靈活性：可1-24之間任意通量；更可升級96 shuttle實現(xiàn)96的高通量

3. 轉(zhuǎn)染耗材的靈活性：既可電轉(zhuǎn)杯，也可電極條板，又可標準24孔板

4. 轉(zhuǎn)染細胞狀態(tài)的靈活性：既可懸浮細胞，又可貼壁細胞原位轉(zhuǎn)染
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